鸡异质核糖核蛋白AB单克隆抗体的制备及鉴定

为了开发抗鸡hnRNP抗体的单克隆抗体，为研究其生物学功能提供关键试剂，构建了重组质粒pET－30a-hnrnpab，并将其转化到感受态细胞E.coli　BL21。IPTG诱导表达，Ni树脂亲和层析纯化可溶性表达的鸡hnRNP-AB蛋白，免疫BALB/c小鼠，用细胞融合技术制备鸡hnRNPAB单克隆抗体细胞系。最后，通过酶联免疫吸附试验（iE、LISA）间接获得单克隆抗体杂交瘤细胞系5h2-h1。间接免疫荧光试验（IFA）和蛋白质-免疫印迹（Western　blot）的分析表明，5h5-h1单克隆抗体可以抑制特异性识别鸡胚成纤维细胞（CEF）表达的hnRNPAB蛋白。同时，IFA和间接免疫细胞化学试验（ICA）的结果也表明，除了特异性识别鸡hnRNP AB蛋白外，5h5-h1单克隆抗体还可以与人类、小鼠、猴子、牛和猪的五种常见哺乳动物细胞系表达的契可夫斯基发生特异性反应。