单增李斯特菌inlK基因缺失株的构建及其生物被膜与消毒剂抗力分析

[目的]研究inlK基因对Lm 90sb2菌株生物膜形成能力的影响，以及生物膜与消毒剂耐药性的关系，为有效防治高山污染提供参考。[方法]以单增李斯特菌Lm90SB2为试验菌株，根据GenBank公布的单增李斯特菌F2365inlK基因序列（登录号：AE017262），利用Primer　Premier5.0软件设计特异性引物，扩增inlK基因上下游同源臂片段，验证缺失菌株，采用同源重组技术构建inlK基因缺失株，用PCR法检测缺失菌株。缺失菌株在标准菌株Lm90SB2构建，分别培养8、12、24和48小时，然后在结晶紫染色。在倒置显微镜观察到了形态变化，在酶标仪测量了生物膜形成能力。含有3 g/L卵磷脂+3 g/L吐温80的PBS溶液和含有10 g/L鸡蛋磷+20 g/L吐温80的PBS溶液溶液被用作新洁尔灭的消毒剂，含有5 g/L硫代硫酸钠＋5g/L卵磷脂+20 g/L吐温80-PBS溶液和10 g/L硫代硫酸钠＋30g/L卵磷脂+20 g/L吐温80溶液的中和剂的消毒剂在中和剂对PBS84消毒剂溶液进行了筛选，其中含有消毒剂＋菌悬液、＋菌悬液＋中和剂和中和剂＋菌悬液、消毒剂+中和剂＋菌悬液、稀释液＋菌悬液（阳性对照）、稀释剂+中和剂+培养基（阴性对照），并检测了新洁尔灭（115130）和84种不同浓度的min消毒剂（1501100）的消毒率。[结果]PCR的研究结果表明，缺失株Lm90SB2inlK成功建成，inlK基因的缺乏导致Lm90sb2菌株的生物膜形成能力显著或极显著降低（P<0.05，P<0.01）。中和剂由3 g/L卵磷脂+3 g/L巴以溶液组成，能有效中和新洁尔灭消毒剂，5 g/L硫代硫酸钠＋5g/L卵磷脂+20 g/L巴以溶液能有效中和84种消毒剂。新洁尔灭（115130）和84种消毒剂（1501100）在min-Lm90sb2inlk菌株1、5和10中的灭菌率显著或极显著高于lm90sb2菌株（P<0.05.P<0.01），在min菌株20中的灭菌率为100%。[结论]inlK基因的缺失导致Lm 90sb2菌株生物膜形成能力降低，对消毒剂的耐药性降低。