miR-21-5p靶向JAK-STAT信号通路抑制Th1细胞极化

目的研究miR－21－5p对1型辅助性T细胞（Th1细胞）极化相关信号通路的调控。方法采用免疫磁珠阴性分选试剂盒从CD4＋T细胞原始（Na ve）小鼠脾脏中提取和分离单个核细胞。Na ve由抗小鼠CD3单克隆抗体、抗小鼠CD28单克隆抗体、抗小鼠白细胞介素4（IL－4（白细胞介素4（IL－4）单克隆抗体、小鼠IL－12和小鼠IL－2混合因子诱导系统诱导？ve将CD4＋T细胞极化到Th1细胞，并将其转染miR－21－5p模拟物或模拟对照。治疗72小时后，Th1正常诱导组和模拟对照组以及miR－21－5p模拟物组CD4＋和干扰素（IFN）+双阳细胞百分比。实时荧光定量PCR用于检测与高山极化相关的关键转录因子和细胞因子的表达水平。Western印迹法用于检测Th1细胞极化相关途径的关键蛋白质及其磷酸化水平。结合双重荧光素酶报告系统，证实miR－21-5p调节了其IL-12受体1（IL-12r1）和信号转录子和转录激活子1（STAT1）的靶IFN-表达。结果免疫磁珠分选法获得高表达？veCD4＋T细胞。miR－21－5p模拟物转染组CD4＋IFN－＋的双阳细胞百分比显著低于Th1正常诱导组和模拟对照组（P<0.01）。与Th1细胞极化相关的JAK STAT信号通路关键转录因子STAT1（P<0.01）、STAT4（P<0.05）和T盒21转录因子（T-bet）（P<0.01）的表达显著下调，关键细胞因子IFN（P<0.01）和信号通路受体IL－12R1（P<0.05）的表达水平也显著下调，STAT1和STAT4蛋白的磷酸化水平也显著降低。结合双重荧光素酶报告系统，miR－21－5p模拟物可以特异性结合IFN（P<0.01）、IL－12R1（P<0.01）和STAT1（P<0.05）基因3’-非翻译区，但相应的靶向位点突变并不影响其表达。结论miR－21－5p可靶下调IFn-、IL－12R1和STAT1的表达，抑制IL－12和IFN介导的JAK STAT信号通路的激活，从而抑制Th1细胞的极化。