耐药基因blaTEM-1、blaIMP-3、fosA3多重重组聚合酶扩增（RPA）快速检测方法的建立和应用

为了建立一种同时检测多种耐药基因的快速检测方法，利用blatem-1、blaIMP-3和fosA3基因保守序列设计了特异性引物。在优化反应条件后，建立了用于上述三个耐药基因恒温检测的多重重组聚合酶扩增（Nipol）方法。条件优化结果表明，当引物浓度为480 mmol/L、37个恒温反应和20个min时，所建立的方法检测效果最好。该方法可以扩增携带blatem-1、blaIMP-3和fosA3基因的菌株的条带。阴性菌株无条带，特异性高。blaTEM-1和blaIEM－3基因的最低检测限为1.810~1拷贝/L，fosA3基因的最低检测限为1.810~2拷贝/L。采用多种RPA方法检测了从浙江省水产养殖环境和生物中分离的400株菌株。从blaTEM－1、blaIEM－3和fosA3-检出率的水产养殖水中分离到的菌株分别为81.00%（81/100）、11.00%（11/100）和29.00%（29/100），blaIEM－3和fosA3-检出率的分离菌株分别为73.67%（221/300）、1.33%（4/300）和23.33%（70/300），与常规PCR基本一致。所建立的RPA方法具有操作简单、响应快、检出限低、结果可靠等优点。适用于多种耐药基因的快速检测。为快速查明养殖产业链各个环节的耐药基因谱，减少耐药基因的传播，保障食品安全提供技术支持。