木薯MeSBE2基因的CRISPR/Cas9 基因编辑载体构建及验证
作者：车延年; 陆小花; 王亚杰; 甄兴厚; 孙雅慧; 李瑞梅; 刘姣; 郭建春; 耿梦婷; 姚远
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木薯淀粉由直链淀粉和支链淀粉组成。淀粉分支酶（SBE星分支酶）是调节木薯支链淀粉合成的关键酶。木薯淀粉branchase 2（MeSBE2）由两个同源基因-MeSBE2.1和MeSBE2.2编码，主要负责木薯支链淀粉的合成。本研究构建了MeSBE2.1和MeSBEBE2.2的双基因编辑载体，并验证了载体的编辑效果。利用在线软件CRISPR－P v2．0设计sgRNA，构建了重组pcambiap1301Cas9－MeSBE2gRNA质粒，在保守区域同时针对MeSBE2.1和MeSBE2.2。将该基因编辑载体转化为农杆菌-LBA4404并感染华南8号木薯。通过PCR扩增 MeSBE 2.1和MeSBE 2.2的靶片段，扩增片段通过Sanger测序并通过hi-Tom分析。结果表明，MeSBE2.1和MeSBE2.2的目标网站编辑成功，没有遗漏。本研究成功构建了MeSBE2.1和MeSBE2.2双基因编辑载体，验证了载体的有效性，有助于进一步获得MeSBE2基因双突变体和高直链淀粉木薯。