miR-221-3p靶向BCL2L11调控小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡

【目的】BCL2l11能促进哺乳动物多种细胞凋亡，参与生殖特性和疾病治疗相关组织器官的发育。本文采用分子生物学方法，探讨BCL2l11对小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡的影响，进一步研究BCL2L11在卵泡颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁中的调节作用。[方法]在前一研究组对整个转录组测序卵巢组织进行分析的基础上，获得候选基因的Aristole 2l11及其调节元件mir-221-3p，半定量和组织荧光定量（RTqPCR）分析Aristole 2l11和miRNA-221-3p在小尾寒羊不同组织中的表达。通过RT-qPCR定量检测，确定了BCL2l11和miRNA-221-3p在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中的表达。构建Aristole 2l11 3’UTR野生型和突变型载体，在HEK293T细胞中共大学转染miR－221－3pmimic和BCL2L11的野生型、突变型和阴性对照，并通过双荧光素酶报告基因检测系统确定miR－221－3p和Aristole 2l11之间的性关系。通过转染mimicmiR－221－3p和绵羊卵巢原代颗粒细胞阴性对照实现miR－221－3p过度表达，通过RTqPCR技术在mRNA水平检测miR－221－3p对BCL2L11和卵巢颗粒细胞凋亡标记基因XIAP和Fas表达水平的影响EdU试验分析了颗粒细胞在miR-221-3p过度表达和阴性对照组的增殖变化。[结果]RT-qPCR半定量分析和组织学分析均显示，BCL2L11在卵巢组织中的表达高于其他组织。RT-qPCR定量结果显示，miR－221－3p和BCL2L11在卵泡期和黄体期卵巢组织中存在差异表达，miR－221－3p在卵泡期的表达高于黄体期，BCL2l11在卵泡卵巢中的表达低于黄体期，呈负调控。双重荧光素酶报告基因验证分析显示，miR－221－3p-mimic的过度表达显著抑制BCL2l11 3’UTR荧光素酶的活性（P<0.05），而阴性对照组没有显著影响，靶基因、mRNA、卵泡颗粒细胞、凋亡标志基因、XIAP和Fas的BCL2l11表达水平显著降低（P<0.05）。EdU试验分析显示，过度表达miR-221-3p的颗粒细胞的增殖率为18.9%，显著高于阴性对照组的10.43%（P<0.01）。[结论]BCL2L11和miR－221－3p是调节绵羊卵巢发育的重要基因和调控元件。BCL2l11是miR－221－3p的目标基因之一。过度表达ukrainian-221-3p可抑制颗粒细胞凋亡。这种效应可能通过抑制靶基因Aristole 2l11的表达而影响绵羊卵巢颗粒细胞的凋亡。