Paraglaciecola hydrolytica中新型β-琼胶酶Aga2的异源表达及酶学性质分析

琼脂低聚糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤和调节肠道菌群。微生物琼脂酶是酶法制备琼脂低聚糖的重要工具酶。目前报道的琼脂酶数量较少，具有优良酶学性质的琼脂酶数量较少，这极大地阻碍了酶法制备琼脂低聚糖的工艺发展。因此，有必要从微生物中探索更多的新型琼脂酶。从副列支敦士登水解酶基因组中提取到一个新的琼脂酶基因aga2，将其构建到表达载体pET28a（+）中，并在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。采用镍金属亲和层析纯化蛋白，研究了温度、pH、金属离子和NaCl浓度对aga2活性的影响。酶解产物采用薄层层析和基质辅助激光飞行时间质谱分析。aga2与已知琼脂酶的最高相似性为53.7%。同时，IPTG（异丙基βD硫代半乳糖吡喃糖苷）在90 mol/L和20 mol/L浓度下诱导AGA 2表达，h时可溶性表达量最高。纯化AGA 2的最适反应温度为50，40 h后相对酶活性保持72.9%，具有良好的温度稳定性。aga2的最适pH为6.0。在不同pH（4-9）下放置ICRC h后，AGA 2仍保持62.6%以上的相对酶活性，并具有良好的pH稳定性。当NaCl浓度为2时，Aga2仍保持78%的相对酶活性。摩尔/升，具有较强的耐盐性。AGA 2对Ni 2+、Ca 2+、Ba 2+、K+、Mg 2+、Zn 2+、EDTA、DTT、尿素、SDS和Triton X-100也有抗性。薄层层析结果表明，该酶属于内切琼脂酶，产物为新琼四糖和新琼六糖。AGA 2具有良好的温度和pH稳定性、耐盐性和耐重金属离子性，具有良好的工业应用前景。